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以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得MPB83基因,克隆后,亚克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,构建的重组穿梭质粒pShuttle—CMV—MPB83经PineⅠ酶切,转化含腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的BJ5183-AD—1感受态细胞,经同源重组获得复制缺陷型重组腺病毒载体pAd-CMV—MPB83。PacⅠ酶切线性化该质粒,转染AD-293细胞进行病毒包装,转染细胞10d后出现细胞病变(CPE)。PCR、RT-PCR、western blot检测到重组病