【摘 要】
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为建立鸭源鸡杆菌(G.anatis)双重PCR检测方法,并对鸡杆菌分离株进行种类鉴定,本研究根据GenBank中G.anatis 12656-12株的gtxA基因序列设计一对PCR引物,合成扩增rpoB基因的引
【机 构】
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河南农业大学禽病研究所; 郑州牧业工程高等专科学校;
【基金项目】
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柏林格公司(BIV,S.A.de C.V.项目合同编号43006167);国家自然科学基金(30972187)
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为建立鸭源鸡杆菌(G.anatis)双重PCR检测方法,并对鸡杆菌分离株进行种类鉴定,本研究根据GenBank中G.anatis 12656-12株的gtxA基因序列设计一对PCR引物,合成扩增rpoB基因的引物作为内参基因,建立了G.anatis双重PCR检测方法。检测结果显示:以G.anatis Yu-PDS-RZ-1-SLG株DNA为模板进行的双重PCR检测能够扩增出两条目的片段;其它16株细菌包括副鸡禽杆菌、多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、福氏志贺菌和奇异变形杆菌均只扩增出了一条目的片段;该方法可以检测到浓度为6.5×102cfu/mL的G.anatis;34株鸡杆菌分离株均扩增出了两条预期大小的目的片段。此外,序列分析结果表明,10株鸡杆菌河南分离株的rpoB基因序列与鸭源鸡杆菌种参考株(CCUG 15563)的同源性最高(97.5%～99.0%),属于鸭源鸡杆菌种。本研究建立的G.anatis双重PCR检测方法,可用于含gtxA基因鸡杆菌菌株的鉴定及临床病原学诊断。
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