四倍体菘蓝ISSR—PCR反应体系优化与遗传差异分析

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采用单因子试验,研究引物、dNTPs、Mg2+、Taq DNA聚合酶及退火温度对PCR扩增的影响,用其建立优化四倍体菘蓝的ISSR—PCR反应体系,分析不向四倍体菘蓝株系的遗传差异性。结果发现ISSR—PCR最佳反应体系为:在25μL的反应体系中,引物浓度为0.76μmol/L,dNTPs浓度为190μmol/L,MgCl2浓度为200μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1.5u,模板DNA浓度为20ng/μL;确定了不同引物最佳退火温度;菘蓝株系间具有中等偏高的遗传差异性,多态性条带达58.22%。
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