【摘 要】
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目的 构建大鼠GAD65重组腺病毒载体.方法 将目的基因大鼠GAD65 cDNA亚克隆到穿梭质粒pShutile启动子CMV的下游,再通过I-Ceu Ⅰ和PI-Sce Ⅰ两个稀有酶切位点,将目的基因GAD65
【机 构】
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广州医学院第二附属医院神经科学研究所,广东,广州,510260
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目的 构建大鼠GAD65重组腺病毒载体.方法 将目的基因大鼠GAD65 cDNA亚克隆到穿梭质粒pShutile启动子CMV的下游,再通过I-Ceu Ⅰ和PI-Sce Ⅰ两个稀有酶切位点,将目的基因GAD65与腺病毒质粒DNA(pAdeno-X)进行体外连接,获得含目的基因GAD65重组腺病毒质粒DNA,后者经限制性内切酶Pae Ⅰ切割后,两端露出反向末端重复序列(rTR),利用脂质体转染293细胞,获得含目的基因重组腺病毒上清.PCR双引物检测含有目的基因GAD65的片段.结果 在挑选的5个空斑中,有4个含GAD65 cDNA阳性重组腺病毒.GAD65重组腺病毒可感染293细胞并在293细胞内进行有效的复制.PCR双引物检测证明含有目的基因GAD65片段,表明利用体外连接法成功构建了含目的基因GAD65重组腺病毒转移载体.结论 成功构建了GAD65重组腺病毒,为进一步研究GAD65重组腺病毒的功能提供了条件.
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