【摘 要】
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目的 研究RNA干扰p21基因对X射线诱导细胞周期解耦联的影响.方法 构建RNA干扰质粒pSilencer3.1-H1 neo-p21,并采用脂质体转染将质粒转入EL-4细胞.采用单克隆抗体免疫荧光标记
【机 构】
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吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室,长春,130021;Key Laboratory of Radiobiology,Ministry of Health,School of Public
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目的 研究RNA干扰p21基因对X射线诱导细胞周期解耦联的影响.方法 构建RNA干扰质粒pSilencer3.1-H1 neo-p21,并采用脂质体转染将质粒转入EL-4细胞.采用单克隆抗体免疫荧光标记及流式细胞术(FCM)检测蛋白表达的变化.采用碘化丙啶(PI)荧光标记及FCM检测多倍体细胞数的变化.结果 量效实验证实,1.0~4.0Gy X射线照射后24 h,EL-4细胞中P21蛋白表达与对照组相比较显著增高.时效实验证实,4.0 Gy X射线照射后8~72 h,EL-4细胞中P21蛋白表达与对照组相比较显著增高.实验证实,0.5~6.0 Gy X射线照射后,EL-4细胞的八倍体细胞数未见明显变化,X射线照射不诱导EL-4细胞周期解耦联.RNA千扰实验证实,p21基冈沉默后,P21蛋白表达于4.0 Gy照射后24及48 h,干扰质粒纽与空质粒对照组相比较显著降低;与此同时,干扰质粒组的八倍体细胞数与空质粒组相比较显著增高.结论 RNA干扰p21基因使P21蛋白表达抑制后,X射线照射可诱导EL-4细胞周期解耦联.提示,P21蛋白可能在电离辐射诱导细胞周期解耦联中起重要作用.
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