【摘 要】
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[目的]建立GAPDH内参基因实时荧光定量PCR方法,为进一步研究中国美利奴羊(新疆型)相关基因的定量表达奠定基础.[方法]采用中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织为试材,根据Genebank
【机 构】
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新疆农业大学动物科学学院,乌鲁木齐830052新疆畜牧科学院,乌鲁木齐830000;新疆农业大学动物科学学院,乌鲁木齐,830052;新疆畜牧科学院,乌鲁木齐,830000;
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[目的]建立GAPDH内参基因实时荧光定量PCR方法,为进一步研究中国美利奴羊(新疆型)相关基因的定量表达奠定基础.[方法]采用中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织为试材,根据Genebank中绵羊GAPDH基因序列,设计并合成一对引物,建立基于SYBR Green I染料技术的Real - Time PCR检测体系,绘制出标准曲线并对其熔解曲线分析.[结果]以cDNA为模板建立的标准曲线循环阈值(Ct)与标准cDNA模板在一定浓度范围内呈良好的线性关系,GAPDH基因标准曲线中模板拷贝数(X)与Ct值的关系为Ct=-3.679 5lgX+ 35.648,相关系数R=0.999 8；试验重复性好,批内和批间变异系数(CV％)分别为0.22％～3.45％和1.30％～4.89％.[结论]所建立的方法具有快速、线性范围广、重复性强等特点,GAPDH可作为内参基因用于绵羊相关基因的定量表达研究.
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