【摘 要】
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[背景]菌株Lechevalieria rhizosphaerae NEAU-A2是一株新的稀有放线菌,其基因组中包含多个与次级代谢产物生物合成相关的基因簇,具有产生丰富代谢产物的潜力.[目的]对稀有放
【机 构】
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中国科学院昆明植物研究所 植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室 云南昆明 650201;东北农业大学生命科学学院 黑龙江哈尔滨 150030;中国科学院昆明植物研究所 植物化学与西部植物资源持
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[背景]菌株Lechevalieria rhizosphaerae NEAU-A2是一株新的稀有放线菌,其基因组中包含多个与次级代谢产物生物合成相关的基因簇,具有产生丰富代谢产物的潜力.[目的]对稀有放线菌L.rhizosphaerae NEAU-A2的次级代谢产物进行研究,以期发现结构新颖或生物活性独特的化合物,并建立其遗传操作系统.[方法]应用硅胶柱色谱和高效液相色谱等方法对菌株NEAU-A2的次级代谢产物进行分离和纯化,整合质谱分析、核磁共振等方法进行结构解析.在对该菌株全基因组测序的基础上,以基因组序列中编码杂合的聚酮合酶-非核糖体肽合成酶(Polyketide Synthase-Nonribosomal Peptide Synthetase,PKS-NRPSs)基因1609为目标基因,利用PCR-Targeting介导的基因置换技术构建重组质粒,通过接合转移的方式导入野生菌株.[结果]从菌株NEAU-A2中分离鉴定了 2个新的吲哚二聚化合物(1,2)和5个已知化合物 N-乙酰色胺(3)、4-((2-(1H-Indol-3-Y1)Ethy1)Amino)-4-Oxobutanoic Acid(4)、Brevianamide F(5)﹑ 4S,7R-Germacra-1(10)E,5E-Diene-11-O1(6)﹑1H-吡咯-2-羧酸(7).接合子通过培养2代即可获得双交换突变菌株,PCR分析结果显示PKS-NRPS基因被成功中断.[结论]从稀有放线菌L.rhizosphaerae NEAU-A2中分离鉴定出7个化合物,并成功建立了该菌的遗传操作系统.
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