大肠埃希菌trp operon的克隆与表达

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色氨酸操纵子所表达酶的高效表达和酶活性的提高,从而构建高产色氨酸菌株。利用PCR的方法从大肠埃希菌基因组中直接克隆色氨酸操纵子,并将其连接到原核表达载体pBV220中,得到重组质粒pBV220-trpoperon,转化大肠埃希菌DH5ct,温度诱导重组蛋白表达,袁达产物经SDS—PAGE分析并用比色法测定其活性。通过凝胶电泳观察PCR扩增产物大小约为7kb,SDS—PAGE鉴定目的蛋白得到了高效表达,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性分别比对照提高了3.4倍和2.5倍。成功构建了重组质粒pBV220-
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