【摘 要】
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目的:探讨上皮细胞转化序列2癌基因(epithelial cell transforming sequence 2 oncogene,ECT 2)沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,以及其潜在的作用机制。方法:首先采用实时
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目的:探讨上皮细胞转化序列2癌基因(epithelial cell transforming sequence 2 oncogene,ECT 2)沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,以及其潜在的作用机制。方法:首先采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)和乳腺癌细胞(MDA-MB-231、SK-BR-3、MCF-7和BT474)中ECT2 mRNA及蛋白的表达水平。将特异性靶向沉默ECT 2基因的siRNA(ECT2 siRNA)转染至乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞,并用细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)通路激活剂处理或者微RNA-101(microRNA-101,miR-101)抑制子转染后,采用CCK-8和FCM法分别检测细胞增殖和凋亡情况,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞中磷酸化ERK(phospho-ERK,p-ERK)、Ras相关的C3肉毒底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)和miR-101的表达水平。结果:与正常乳腺上皮细胞相比,乳腺癌细胞中ECT2 mRNA和蛋白的表达水平均明显升高(P值均<0.05)。ECT 2基因沉默后,乳腺癌细胞增殖被明显抑制(P<0.05),细胞凋亡被明显促进(P<0.05),并且细胞中p-ERK和Rac1表达被明显下调(P值均<0.05),而miR-101表达被明显上调(P<0.05)。ERK激活剂作用后,ECT2 siRNA转染对p-ERK、miR-101和Rac1表达的影响被明显反转(P值均<0.05);miR-101抑制子转染后,ECT2 siRNA转染对细胞增殖、凋亡以及Rac1表达的影响被反转(P值均<0.05),而对p-ERK表达没有明显影响(P>0.05)。结论:ECT 2基因沉默可能通过ERK/miR-101/Rac1信号转导通路,调节乳腺癌细胞的增殖和凋亡。
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