【摘 要】
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目的观察肠道病毒(EV)-D68蛋白2A在EV-D68病毒感染293T细胞过程中对抗病毒IFN-Ⅰ通路的影响。方法免疫印迹法(Western blot)检测重组2A蛋白、IFN-α因子及信号传导及转录激活因子1(STAT1)的蛋白表达水平；免疫荧光技术(Immunofluorescence，IF)检测细胞内不同时间点EV-D68病毒VP1与2A的表达；通过观察细胞病变效应(cytopathic e
【机 构】
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中国医学科学院&北京协和医学院 医学生物学研究所，昆明 650118,美国爱荷华大学 52241,中国医学科学院&北京协和医学院 医学生物学研究所，昆明 650118,中国医学科学院&
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目的观察肠道病毒(EV)-D68蛋白2A在EV-D68病毒感染293T细胞过程中对抗病毒IFN-Ⅰ通路的影响。
方法免疫印迹法(Western blot)检测重组2A蛋白、IFN-α因子及信号传导及转录激活因子1(STAT1)的蛋白表达水平；免疫荧光技术(Immunofluorescence，IF)检测细胞内不同时间点EV-D68病毒VP1与2A的表达；通过观察细胞病变效应(cytopathic effect，CPE)，计算细胞培养半数感染量(50% cell culture infective dose，CCID50)来检测病毒感染性滴度；利用实时荧光定量PCR技术(real-time PCR，RT-PCR)检测IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的表达。
结果成功构建pCLIPf-2A质粒，在转染后的24 h，重组蛋白2A有较好的表达。病毒滴度结果表明，2A蛋白在感染后期可以有效促进EV-D68病毒的增殖复制。IFN-α干扰素检测结果表明，EV-D68 2A可以刺激IFN-α的表达。IFN-Ⅰ干扰素相关基因检测表明，EV-D68＋2A组、2A组及EV-D68对照组的IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的IFN-α mRNA水平均有不同程度的上调或下调，但是三者诱导相关基因表达上调、下调的趋势不同。对IFN-Ⅰ干扰素通路下游蛋白STAT1检测结果表明，各组均能有效诱导STAT1蛋白的表达。
结论EV-D68 2A可以促进抗病毒IFN-Ⅰ通路相关基因及下游蛋白的应答，病毒感染后期，2A可以促进病毒较快增殖。
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