TF/FⅦa体外诱导大肠癌LOVO细胞系表达MMP-7mRNA的研究

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目的 观察组织因子/活性凝血七因子(TF/FⅦa)诱导大肠癌LOVO细胞系表达基质金属蛋白酶7(MMP-7)mRNA及信号传导途径.方法 构建靶向组织因子基因干扰的RNAi质粒并稳定转染LOVO细胞获得TFRNAi LOVO细胞系,Western blot检测干扰效率;RT-PCR观察100 nmol/L FⅦa刺激0、4、8、12、24h后LOVO细胞中MMP-7mRNA的变化,Northern blot证实时间效应及测定0、10、50、100、200 nmol/L FⅦa刺激后的MMP-7mRNA水平;100 nmol/L FⅦa分别刺激LOVO细胞0、4、8、12、16、24h,Western blot测定p-P38的水平;Northern blot分别检测预先使用10 mmol/L P38阻断剂SB203580 0.5h再以100 nmol/L FⅦa刺激LOVO细胞8h及100 nmol/L FⅦa刺激TFRNAi LOVO细胞系8h后MMP-7mRNA水平.结果 Northern blot结果显示FⅦa刺激MMP-7mRNA表达存在时间、浓度依赖性;Western blot测定FⅦa刺激p-P38表达存在时间依赖性.应用P38通路阻断剂SB203580后MMP-7mRNA基因表达下降59.2%,转染组织因子干扰质粒的LOVO细胞中,MMP-7mRNA的表达水平较LOVO细胞组下降48%.结论 活性Ⅶ因子与组织因子结合诱导体外大肠癌LOVO细胞系表达MMP-7mRNA,其机理可能与P38通路有关。

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