【摘 要】
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目的:探讨重组exendin-4类似物EW的基因工程制备方法及纯化后的体内降糖活性。方法:设计引物并以PCR法扩增EW基因,其N-端具有胰蛋白酶的酶切位点,C-端具有终止密码子,通过串
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目的:探讨重组exendin-4类似物EW的基因工程制备方法及纯化后的体内降糖活性。方法:设计引物并以PCR法扩增EW基因,其N-端具有胰蛋白酶的酶切位点,C-端具有终止密码子,通过串联的方式在大肠杆菌JM109中高效表达。包涵体纯化后,通过胰蛋白酶对融合蛋白进行酶解,继而纯化,获得重组EW。测定腹腔内注射EW、exendin-4及0.9%氯化钠溶液后C57BL/6小鼠体内血糖情况。结果:将串联8个EW拷贝后的8EW基因在大肠杆菌中表达,获得的包涵体经过增溶保护后以胰蛋白酶酶切获得EW,重组EW的收率为200~250 mg/L发酵液。纯化冷冻干燥后的EW在C57BL/6小鼠体内降糖活性与exendin-4相当。结论:基因工程制备的EW是一种很有前景的抗糖尿病药物。
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