【摘 要】
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目的 利用RNA干扰(RNAi)技术抑制骨肉瘤MG63细胞中葡萄糖转运蛋白(Glut-1)表达,观察对MG63细胞在体内外功能的影响.方法 克隆Glut-1基因,通过慢病毒感染293T细胞,构建成干扰
【机 构】
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同济大学附属同济医院骨科,上海,200065
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目的 利用RNA干扰(RNAi)技术抑制骨肉瘤MG63细胞中葡萄糖转运蛋白(Glut-1)表达,观察对MG63细胞在体内外功能的影响.方法 克隆Glut-1基因,通过慢病毒感染293T细胞,构建成干扰、原始及对照组的3种慢病毒载体后分别转染到人骨肉瘤MG63细胞,形成干扰、原始及对照3个稳转细胞株.应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术鉴定细胞RNAi后Glut-1mRNA的表达.噻唑蓝(MTT)检测RNAi后细胞增殖的改变;根据人工基底膜的细胞穿过数量检测RNAi后细胞侵袭功能改变;流式细胞术检测RNAi后细胞周期的改变.利用异种移植瘤模型观察Glut-1干扰后对肿瘤生长的影响.结果 RNAi成功后,Glut-1的mRNA水平明显降低(P＜0.05).干扰组细胞吸光度值的均值较原始组及对照组明显降低(P＜0.05);细胞侵袭实验显示干扰组细胞穿过人工基底膜的数量明显减少(P＜0.05);细胞周期中干扰组细胞G1相61.77％被阻断.裸鼠皮下成瘤实验表明,抑制Glut-1的表达可抑制肿瘤的生长.结论 RNAi抑制MG63细胞Glut-1的表达,可通过糖代谢过程来发挥肿瘤抑制作用.
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