【摘 要】
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目的通过基因工程技术构建人α1,2岩藻糖苷转移酶(ht)基因表达载体,以期HT在猪细胞表达,削减异种抗原α-Gal的合成.方法 Hind Ⅲ/Xba Ⅰ双酶切pcDNA3和pRc/CMV-htcDNA 2种质
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目的通过基因工程技术构建人α1,2岩藻糖苷转移酶(ht)基因表达载体,以期HT在猪细胞表达,削减异种抗原α-Gal的合成.方法 Hind Ⅲ/Xba Ⅰ双酶切pcDNA3和pRc/CMV-htcDNA 2种质粒,回收所需酶切片段,进而连接、转化感受态细菌,纯化pcDNA3-htcDNA重组质粒,对其进行多酶切、PCR和测序鉴定.结果多酶切反应产物电泳可见内切酶Pvu Ⅰ酶切产生6.5kb片段,bgl Ⅱ酶切产生4.6kb和1.9kb片段,Apa Ⅰ酶切产生5.6kb和0.9kb片段,Hind Ⅲ/Xba Ⅰ酶切产生5.4kb和1.1kb片段,结果与设计相符.PCR反应扩增出1098 bp的htcDNA核心片段.序列测定结果与Genbank中htcDNA序列比对,表明在pcDNA3质粒多克隆位点成功定向连接了htcDNA全长序列.结论成功构建了pcDNA3-htcDNA重组质粒.
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