【摘 要】
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目的:克隆、表达并纯化大肠杆菌M15碱性磷酸酶(EAP)成熟肽(phoA),分析其活性。方法:采用PCR技术从M15基因组DNA中扩增出phoA编码基因;构建其原核表达载体pCold-TF-EAP;转入E.
【机 构】
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扬州大学医学院; 扬州大学临床医学院检测中心;
【基金项目】
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江苏省基础研究计划(自然科学基金)面上项目(“opaI-rmp-淋病奈瑟菌突变株诱导的免疫保护作用研究”,BK2009193);国家自然科学青年基金项目(“以细菌菌影为载体的新型淋病奈瑟菌靶向粘膜疫苗的实验研究”,31100652)资助
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目的:克隆、表达并纯化大肠杆菌M15碱性磷酸酶(EAP)成熟肽(phoA),分析其活性。方法:采用PCR技术从M15基因组DNA中扩增出phoA编码基因;构建其原核表达载体pCold-TF-EAP;转入E.coli BL21(DE3)进行表达;IMAC Ni-NTA柱层析法纯化重组蛋白;重组蛋白与底物对硝基苯磷酸二钠显色反应分析其活性。结果:克隆得到了序列约1 400 bp phoA编码基因,原核表达了分子量约为100 kDa的融合重组EAP(rEAP),纯化获得的rEAP具有催化磷酸单酯的活性,有效反应温度范围大,在27℃～67℃都具有较高的催化活性,在pH 7.5～8.0间催化活性最高。结论:克隆了可正确表达EAP的phoA编码基因,为EAP的工业化生产及应用提供了生物材料。
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