探讨我院烧伤患者中产VIM–2型金属β内酰胺酶(MBL)的鲍氏不动杆菌(AB)对碳青霉烯类抗生素的耐药机制及同源性。
方法2011年9月—2014年3月，收集从笔者单位收治的烧伤住院患者痰液、尿液、血液、脓液、引流液中分离的400株AB(经鉴定)。采用全自动微生物鉴定及药敏分析系统测定菌株对复方磺胺甲唑、氨曲南等15种抗生素的耐药性。针对抗碳青霉烯类抗生素菌株，采用改良Hodge试验筛选产碳青霉烯酶菌株。PCR法及测序检测产碳青霉烯酶AB的碳青霉烯酶基因、携带blaVIM–2基因的产碳青霉烯酶AB的可移动基因元件1类整合子(Intl1)及其保守片段(CS)。针对携带blaVIM–2基因产碳青霉烯酶AB行亚胺培南–乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验以及亚胺培南–EDTA与头孢他啶–EDTA增效试验验证其产MBL情况，并分析产VIM–2型MBL的AB的耐药情况。对产VIM–2型MBL的AB行质粒接合试验检测质粒转移情况，PCR法检测外膜蛋白CarO基因。十二烷基硫酸钠–聚丙烯酰胺凝胶电泳检测携带CarO基因的产VIM–2型MBL的AB菌株的CarO蛋白表达量。肠杆菌基因间重复一致序列(ERIC)–PCR法对产VIM–2型MBL的AB菌株进行基因分型，分析同源性。
结果(1)400株AB对左氧氟沙星和复方磺胺甲唑的耐药率低。共筛选出381株抗碳青霉烯类抗生素AB，其中240株产碳青霉烯酶。(2)240株产碳青霉烯酶AB中检出18株携带VIM–2酶基因blaVIM–2，占7.5%；133株携带blaTEM–1基因，占55.42%；195株携带blaOXA–23基因，占81.25%；188株携带blaarmA基因，占78.33%。(3)18株携带blaVIM–2基因的产碳青霉烯酶AB均携带Intl1基因，呈现Intl1–VIM连锁携带型，Intl1可变区CS呈现多样性。(4)经验证，18株携带blaVIM–2基因的产碳青霉烯酶AB均为产VIM–2型MBL的AB。该18株AB菌株对复方磺胺甲唑的耐药率最低，其次为左氧氟沙星和头孢哌酮/舒巴坦，对其余抗生素的耐药率均大于60.00%。(5)18株产VIM–2型MBL的AB经多次质粒接合试验均未见耐药基因阳性转移菌株。(6)18株产VIM–2型MBL的AB中9株携带CarO基因，携带CarO基因的产VIM–2型MBL的AB菌株外膜蛋白CarO缺失或表达量减少。(7)18株产VIM–2型MBL的AB ERIC–PCR指纹图谱共分6个谱型，A、B、C、F型菌株分别为6、4、3、1株，D、E型菌株各为2株。
结论blaTEM–1、blaOXA–23和blaarmA基因仍是引起AB耐药的主要原因之一；与此同时，产VIM–2型MBL联合外膜蛋白CarO缺失或改变也是导致烧伤患者AB对碳青霉烯类抗生素耐药的重要机制之一，其中Intl1基因也可能参与了blaVIM–2基因的传播。