论文部分内容阅读
【摘要】目的：薄层色谱法鉴别金乌骨通胶囊中的淫羊藿苷。方法：采用薄层色谱法对制剂中含有淫羊藿苷进行定性鉴别。结果：薄层色谱法检出淫羊藿苷，且斑点清晰。结论：该方法可作为金乌骨通胶囊中淫羊藿的定性鉴别方法，结果稳定性、重复性较好。
【关键词】金乌骨通胶囊；淫羊藿；薄层色谱
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）02-0012-02
金乌骨通胶囊是由金毛狗脊、木瓜、乌梢蛇、葛根、淫羊藿、姜黄、补骨脂等多味药组成，具有滋补肝肾，祛风除湿，活血通络的功效。用于肝肾不足，风寒湿痹，骨质疏松，骨质增生引起的腰腿酸痛、肢体麻木等症[1]。其中淫羊藿具有补肾阳，强筋骨，袪风湿的作用，用于肾阳虚衰，阳痿遗精，筋骨痿软，风湿痹痛，麻木拘挛[2]（P308）。淫羊藿药材中主要含有淫羊藿苷、淫羊藿次苷、巫山淫羊藿苷、宝藿苷VI、生物碱、挥发油等。本实验选用淫羊藿苷为对照对药品中的淫羊藿进行定性鉴别，该方法简便易操作，结果重复性较好。
1仪器与试药
SK250LHC超声波清洗器（上海科导仪器有限公司），梅特勒AG135电子天平，卡玛Linomat5半自动点样仪。淫羊藿苷对照品（批号：110737-200415）购于中国药品生物制品检定所；样品和缺淫羊藿阴性样品由贵州盛世龙方制药有限公司提供，硅胶G预制板（批号：20090406）和硅胶G（批号：0110916）（青岛海洋化工厂分厂）；水为纯净水（娃哈哈）；其它试剂均为分析纯。
2方法[3]与结果
21提取方法的考察分别称取金乌骨通胶囊内容物细粉10g，按下述方法处理：①加乙酸乙酯10ml，超声提取15分钟；②加70%乙醇溶液10ml，超声提取30分钟；③加甲醇10ml，超声提取30分钟；④加乙醇20ml，超声提取30分钟[2]（P307）。提取后，放冷，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml超声使溶解，静置，取上清液为供试品溶液①-④。取缺淫羊藿阴性10g，照方法④提取，作为阴性对照溶液。另取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。
取上述各供试品溶液、阴性对照溶液、对照品溶液各3μl，点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水 （135：6：2 ） 静置至澄清的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加热至斑点显色清晰。结果方法①无对应主斑点，方法②③主斑点清晰但背景较深，方法④主斑点清晰且背景较浅，阴性对照无干扰。故选取方法④为淫羊藿苷薄层鉴别的提取方法。
22展开系统的考察取三个批号金乌骨通胶囊按提取方法④分别制成供试品溶液。取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各3μl，点于薄层板上，分别在下述各展开系统中展开：①硅胶G板，氯仿-甲醇-丁酮 （1：2：2）；②硅胶G板，氯仿-甲醇-水 （135：6：2）静置至澄清的下层溶液；③硅胶H板，乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水 （10：1：1：1）[2]（P307）。展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃下加热至斑点显色清晰。结果系统①分离效果差，系统②分离效果较好，主斑点位置居中，阴性无干扰，背景干扰小，系统③主斑点位置对应不理想，阴性对照无干扰。故选取系统②为淫羊藿苷薄层鉴别展开系统。
23显色方法的考察取三个批号金乌骨通胶囊按提取方法④分别制成供试品溶液。取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各3μl，分别点于硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水（135：6：2）静置至澄清的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，分别以下述各方法显色：①喷以5%三氯化铁乙醇溶液，晾干，日光下检视，显墨绿色斑点；②喷以1%三氯化铝乙醇溶液，晾干，在紫外灯（365nm）下检视，显橙红色荧光斑点；③喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加热，日光下检视，显黄绿色斑点。结果显色剂①斑点略显模糊边界不明显，色彩与背景对比不强；显色剂②斑点荧光较弱，与背景荧光混合较严重，斑点边界不明显，不易辨识；显色剂③斑点颜色鲜明，与背景颜色对比较强，斑点边界明显；阴性对照无干扰。故选取显色方法③为淫羊藿苷薄层鉴别的显色方法。
24点样量的考察取金乌骨通胶囊按提取方法④制成供试品溶液。取供试品溶液2、3、4、5、6μl、阴性对照溶液和对照品溶液各3μl，点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水 （ 135：6：2）静置至澄清的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃下加热至斑点显色清晰。结果点样量较小斑点不够清晰，点样量较大则背景颜色较深，点样量5μl时斑点显色清晰且背景干扰较小，阴性对照无干扰。
故选取5μl为淫羊藿苷薄层鉴别的点样体积。
25耐用性考察按照国家药典委员会“中药分析方法验证指导原则实施细则”的相关要求，进行以下耐用性考察：①温度的考察：进行了低温（4℃）、室温（24℃）、高温（40℃）的考察，分离结果均较好。②湿度的考察：进行了低湿度（25%）、中等湿度（60%）和高湿度（75%）的考察，结果表明在上述条件下都能较好分离。
3讨论
淫羊藿为金乌骨通胶囊中的重要组成药味，在生产中的质量控制和流通中监督检查均应将其作为药品质量的指标之一，而原标准中此项目暂缺，本方法可对其进行有效补充。根据上述不同条件下的实验结果进行组合，金乌骨通胶囊中淫羊藿苷的薄层色谱鉴别方法为：取本品内容物10g，加乙醇20ml，超声提取30分钟，放冷，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml超声使溶解，静置，取上清液为供试品溶液。取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水（135：6：2）静置至澄清的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加热，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同黄绿色的斑点。
展开系统的考察中，系统③为淫羊藿薄层鉴别的经典系统，但在反复试验后发现其展开效果并不理想，虽斑点清晰位置适中，但由于药品中其他物质的干扰，对照品主斑点位置总是明显高于样品中主斑点位置，故最终选用无此现象的系统②。缺淫羊藿阴性对照在此薄层色谱系统中无干扰，故可采用淫羊藿苷作为对照品溶液对药品中的淫羊藿进行定性鉴别；色谱中主斑点清晰明显，位置居中，无论是预制板还是手工板，结果稳定，重现性较好。此方法可作为金乌骨通胶囊中淫羊藿药材的薄层色谱定性鉴别。
参考文献
[1]WS-10140（ZD-0140）-2002，金乌骨通胶囊[S].
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.
（收稿日期：20131207）
【关键词】金乌骨通胶囊；淫羊藿；薄层色谱
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）02-0012-02
金乌骨通胶囊是由金毛狗脊、木瓜、乌梢蛇、葛根、淫羊藿、姜黄、补骨脂等多味药组成，具有滋补肝肾，祛风除湿，活血通络的功效。用于肝肾不足，风寒湿痹，骨质疏松，骨质增生引起的腰腿酸痛、肢体麻木等症[1]。其中淫羊藿具有补肾阳，强筋骨，袪风湿的作用，用于肾阳虚衰，阳痿遗精，筋骨痿软，风湿痹痛，麻木拘挛[2]（P308）。淫羊藿药材中主要含有淫羊藿苷、淫羊藿次苷、巫山淫羊藿苷、宝藿苷VI、生物碱、挥发油等。本实验选用淫羊藿苷为对照对药品中的淫羊藿进行定性鉴别，该方法简便易操作，结果重复性较好。
1仪器与试药
SK250LHC超声波清洗器（上海科导仪器有限公司），梅特勒AG135电子天平，卡玛Linomat5半自动点样仪。淫羊藿苷对照品（批号：110737-200415）购于中国药品生物制品检定所；样品和缺淫羊藿阴性样品由贵州盛世龙方制药有限公司提供，硅胶G预制板（批号：20090406）和硅胶G（批号：0110916）（青岛海洋化工厂分厂）；水为纯净水（娃哈哈）；其它试剂均为分析纯。
2方法[3]与结果
21提取方法的考察分别称取金乌骨通胶囊内容物细粉10g，按下述方法处理：①加乙酸乙酯10ml，超声提取15分钟；②加70%乙醇溶液10ml，超声提取30分钟；③加甲醇10ml，超声提取30分钟；④加乙醇20ml，超声提取30分钟[2]（P307）。提取后，放冷，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml超声使溶解，静置，取上清液为供试品溶液①-④。取缺淫羊藿阴性10g，照方法④提取，作为阴性对照溶液。另取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。
取上述各供试品溶液、阴性对照溶液、对照品溶液各3μl，点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水 （135：6：2 ） 静置至澄清的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加热至斑点显色清晰。结果方法①无对应主斑点，方法②③主斑点清晰但背景较深，方法④主斑点清晰且背景较浅，阴性对照无干扰。故选取方法④为淫羊藿苷薄层鉴别的提取方法。
22展开系统的考察取三个批号金乌骨通胶囊按提取方法④分别制成供试品溶液。取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各3μl，点于薄层板上，分别在下述各展开系统中展开：①硅胶G板，氯仿-甲醇-丁酮 （1：2：2）；②硅胶G板，氯仿-甲醇-水 （135：6：2）静置至澄清的下层溶液；③硅胶H板，乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水 （10：1：1：1）[2]（P307）。展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃下加热至斑点显色清晰。结果系统①分离效果差，系统②分离效果较好，主斑点位置居中，阴性无干扰，背景干扰小，系统③主斑点位置对应不理想，阴性对照无干扰。故选取系统②为淫羊藿苷薄层鉴别展开系统。
23显色方法的考察取三个批号金乌骨通胶囊按提取方法④分别制成供试品溶液。取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各3μl，分别点于硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水（135：6：2）静置至澄清的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，分别以下述各方法显色：①喷以5%三氯化铁乙醇溶液，晾干，日光下检视，显墨绿色斑点；②喷以1%三氯化铝乙醇溶液，晾干，在紫外灯（365nm）下检视，显橙红色荧光斑点；③喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加热，日光下检视，显黄绿色斑点。结果显色剂①斑点略显模糊边界不明显，色彩与背景对比不强；显色剂②斑点荧光较弱，与背景荧光混合较严重，斑点边界不明显，不易辨识；显色剂③斑点颜色鲜明，与背景颜色对比较强，斑点边界明显；阴性对照无干扰。故选取显色方法③为淫羊藿苷薄层鉴别的显色方法。
24点样量的考察取金乌骨通胶囊按提取方法④制成供试品溶液。取供试品溶液2、3、4、5、6μl、阴性对照溶液和对照品溶液各3μl，点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水 （ 135：6：2）静置至澄清的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃下加热至斑点显色清晰。结果点样量较小斑点不够清晰，点样量较大则背景颜色较深，点样量5μl时斑点显色清晰且背景干扰较小，阴性对照无干扰。
故选取5μl为淫羊藿苷薄层鉴别的点样体积。
25耐用性考察按照国家药典委员会“中药分析方法验证指导原则实施细则”的相关要求，进行以下耐用性考察：①温度的考察：进行了低温（4℃）、室温（24℃）、高温（40℃）的考察，分离结果均较好。②湿度的考察：进行了低湿度（25%）、中等湿度（60%）和高湿度（75%）的考察，结果表明在上述条件下都能较好分离。
3讨论
淫羊藿为金乌骨通胶囊中的重要组成药味，在生产中的质量控制和流通中监督检查均应将其作为药品质量的指标之一，而原标准中此项目暂缺，本方法可对其进行有效补充。根据上述不同条件下的实验结果进行组合，金乌骨通胶囊中淫羊藿苷的薄层色谱鉴别方法为：取本品内容物10g，加乙醇20ml，超声提取30分钟，放冷，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml超声使溶解，静置，取上清液为供试品溶液。取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水（135：6：2）静置至澄清的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加热，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同黄绿色的斑点。
展开系统的考察中，系统③为淫羊藿薄层鉴别的经典系统，但在反复试验后发现其展开效果并不理想，虽斑点清晰位置适中，但由于药品中其他物质的干扰，对照品主斑点位置总是明显高于样品中主斑点位置，故最终选用无此现象的系统②。缺淫羊藿阴性对照在此薄层色谱系统中无干扰，故可采用淫羊藿苷作为对照品溶液对药品中的淫羊藿进行定性鉴别；色谱中主斑点清晰明显，位置居中，无论是预制板还是手工板，结果稳定，重现性较好。此方法可作为金乌骨通胶囊中淫羊藿药材的薄层色谱定性鉴别。
参考文献
[1]WS-10140（ZD-0140）-2002，金乌骨通胶囊[S].
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.
（收稿日期：20131207）