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首先通过引物设计扩增嗜热内切-β-1，4-葡聚糖酶基因，然后采用NotI和XhoI双酶切目的基因与载体pPICZct—A，通过T4连接酶连接后转化DH5ct菌株，挑取阳性克隆进行测序，测序正确阳性克隆放大培养，大量提取质粒，并采用限制性内切酶SacI线性化质粒，电转化感受态酵母细胞，经培养后挑选转化子分别对应点种到MM、MD平板，并利用ZeocinTM获得多拷贝重组子，最后经甲醇诱导，并于48、54h取样，经SDS—PAGE分析，结果表明整合嗜热内切-β-1，4-葡聚糖酶的毕赤酶母工程茵株构建成功．