【摘 要】
：
目的真核表达具有天然构象的中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)S1蛋白,并进行免疫反应性鉴定。方法以pcDNA3.1-S重组质粒为模板,PCR扩增S1基因,连接至pFastBac1质粒,构建重组
【基金项目】
：
国家重点研发计划课题(No.2017YFD0501804)
论文部分内容阅读
目的真核表达具有天然构象的中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)S1蛋白,并进行免疫反应性鉴定。方法以pcDNA3.1-S重组质粒为模板,PCR扩增S1基因,连接至pFastBac1质粒,构建重组质粒pFB1-S1。将pFB1-S1转化至DH10Bac感受态中,构建重组杆粒BpFB1-S1,然后转染sf9细胞获得重组杆状病毒rpFB1-S1并连续传代。将第四代rpFB1-S1接种sf9细胞后悬浮培养96h,取上清,用PEG8000浓缩并进行免疫亲和层析纯化,采用SDS-PAGE和Western blot鉴定其分子质量及免疫反应性;另取感染rpFB1-S1 48h的sf9细胞进行IFA鉴定。结果 S1基因PCR扩增产物大小为2 212bp,与预期相符。重组质粒pFB1-S1经酶切和测序分析鉴定构建正确。重组杆粒BpFB1-S1经PCR鉴定构建正确。IFA试验可见感染rpFB1-S1的sf9细胞出现特异性绿色荧光,即有目的蛋白表达。SDSPAGE显示纯化的重组S1为单一100×103(Mr)蛋白条带,Western blot检测该蛋白能被鼠抗S-RBD蛋白单克隆抗体识别。结论成功表达了具有免疫反应性的MERS-CoV S1蛋白,为MERS-CoV快速诊断方法的建立及候选疫苗的构建奠定了基础。
其他文献
化工行业作为国家支柱产业之一,对国民经济的发展具有重要作用。化工项目具有投资大、单元多、工艺复杂、高温高压、易燃易爆、有毒有害等特点,建设风险相对较大。化工项目的
技术创新可以提高企业竞争力,而创新管理则是企业技术创新能否成功的保障。KT是一家主要生产方便面的公司,经过近十七年的发展,已经成为我国面制品行业的龙头企业。2008年,随
在中国读者尤其是中国的女性读者中，《简·爱》一直是接受度最高的西方小说之一。勃朗特不无狡黠的叙事策略，赢得了不同层次的读者尤其是不同层次的女性读者对作品的认同。
梵高(1853．3．30——1890．7．29)是十九世纪后期荷兰继伦勃朗之后的一位最伟大的印象派艺术大师，是荷兰人民引为自豪的画家。他37岁的短暂的一生却走过了光辉的历程，创作了大量的艺术
在个人读书经历中，我越来越觉得契诃夫对我来说不仅是一种境界，而且更是一种深刻的癖好。托尔斯泰在读过他的《宝贝儿》后，曾经掩卷长叹，认为再也没有一个人能写得这样好，再无人能
建筑业已经成为国民经济的重要支柱产业,但发展快速同时暴露出的创新不足、与市场需求不匹配、绩效不高等问题急需研究。本文从知识的角度,结合本地建筑企业的实际,研究他们
为进一步守住药品安全防线,做好药品安全事件快速预警和应急处置,有效防范和应对药品安全事件提供参考。回顾药用胶囊铬超标系列事件的处置过程,通过剖析药用胶囊铬超标系列
提出了一种基于离散曲波变换和支持向量机的掌纹识别方法.首先将所有掌纹样本图像和测试图像通过基于W rapp ing的快速离散曲波变换进行分解,从而获得不同尺度、不同角度的曲波变换系数;掌纹重要特征信息包含在曲波变换分解系数中的低频系数中,因此将分解系数变换形成特征向量后作为特征参数送入支持向量机中进行学习训练;最后将训练好的支持向量机用于掌纹分类.基于香港理工大学Palmprint掌纹数据库进行了
目的:探讨国产试剂盒与瑞典Parmacia CAP过敏原检测系统测定人血清中的户尘螨过敏原特异性抗体IgE是否存在差异。方法:以300例临床怀疑为过敏性疾病患者的血清为研究样本,每
六十年代初的一个春天，北方的原野上还闪着点点残雪，带着去江南组稿的任务，带着两部诗集，我登上了南下的列车。