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目的
探讨沉默Annexin-A1 (Anxa1)基因对小胶质细胞系BV-2细胞生长、迁移能力的影响及其可能机制。
方法采用RT-PCR和Western blot法从基因和蛋白水平验证小干扰RNA (siRNA)对小胶质细胞系BV-2细胞内Anxa1的沉默效率,采用MTT法检测Anxa1 siRNA对BV-2细胞增殖的作用,膜联蛋白Ⅴ/碘化丙啶(AnnexinⅤ/PI)双染流式细胞术检测Anxa1 siRNA对BV-2细胞凋亡的影响,应用Transwell小室检测Anxa1 siRNA对BV-2细胞迁移能力的影响,Western blot法检测细胞周期和迁移相关信号通路蛋白的表达。
结果Anxa1 siRNA干扰组在24 h、48 h、72 h细胞生长抑制率分别为(16.9±2.1)%、(23.1±3.6)%和(42.4±1.7)%,与siRNA-NC组[分别为(1.35±0.5) %、(2.06±0.7) %和(8.65±0.9) %]比较,差异有统计学意义(P<0.05),沉默Anxa1对BV-2细胞的增殖发挥抑制作用;转染后48 h Anxa1 siRNA组细胞凋亡率为(18.4±2.1)%,明显高于siRNA-NC组(5.2±0.3)%和空白对照组(4.3±0.2)%;Anxa1 siRNA干扰组细胞迁移能力(28.7±5.2)明显低于siRNA-NC组(173.4±11.4, P<0.01),Anxa1 siRNA干扰可显著下调细胞周期蛋白Cyclin D1的表达水平和激活p38与JNK信号通路。
结论siRNA沉默Anxa1基因可抑制小胶质细胞的生长、迁移能力,分别通过下调Cyclin D1和激活p38与JNK信号通路来实现。