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以尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）为对象，采用体内注射植物血细胞凝集素（PHA）方式收集有丝分裂后期的鱼体头肾细胞，低渗法制片，运用激光显微分离获得尼罗罗非鱼1号染色体，分离后的单染色体通过特异性酶切和LA-PCR体外扩增，得到500-2 000 bp之间的DNA片段，并通过Southern blot和微卫星标记得到验证。扩增片段通过电泳回收、连接转化、感受态细胞培养等步骤构建尼罗罗非鱼1号染色体微克隆文库，克隆片段长度在300-600 bp之间。