【摘 要】
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目的 应用重组腺相关病毒2(recombinant adeno-associated virus 2,rAAV2)介导hTGF-β_1基因体内转染兔退变椎问盘髓核细胞,观察基因产物的表达及其对退变髓核细胞蛋白多糖合
【机 构】
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青岛大学医学院附属医院骨科山东省创伤骨科研究所,山东青岛,266003;山东大学附属济南市中心医院骨外科
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目的 应用重组腺相关病毒2(recombinant adeno-associated virus 2,rAAV2)介导hTGF-β_1基因体内转染兔退变椎问盘髓核细胞,观察基因产物的表达及其对退变髓核细胞蛋白多糖合成的生物调节作用.方法 于24只成年新西兰大白兔,雌雄不限,体重1.7～2.2 kg,L_(1、2)、L_(2、3)、L_(3、4)、L_(4、5)椎间盘注射25μL浓度为1 mmoFL的纤维结合素片段(fibronecfin fragment,Fn-f)制备椎间盘退变模型,注射Fn-f4周时的造模椎间盘模拟早期退变的椎间盘.将24只兔随机分为3组(n=8),A、B、C组分别于造模椎间盘髓核内注射25 μL rAAV_2-hTGF-β_1(1×10~(12)vg/mL)、rAAV_(2-)增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP,rAAV_2-EGFP)、PBS.术后1周A、C组各处死2只兔,取髓核组织采用免疫组织化学染色观察hTGF-β_1的表达;术后4、8、12周每组取2只兔髓核组织,,~(35)S整合分析法检测新合成蛋白多糖的含量;术后12周处死B组2只兔,荧光显微镜观察髓核组织中EGFP的表达.结果 术后1周,免疫组织化学染色示A组髓核细胞及基质中广泛存在强阳性染色颗粒,C组仅存在少量阳性颗粒.,~(35)S整合法检测示,各时间点A组,~(35)S蛋白多糖合成率均高于B、C组,比较差异有统计学意义(P0.05).术后12周,荧光显微镜下观察B组盘髓核组织可见大量绿色荧光表达.结论 新型基因转导载体rAAV_2可有效介导hTGF-β_1基因体内转染兔退变髓核细胞,基因产物可持续表达超过12周,hTGF-β_1可有效促进退变髓核细胞蛋白多糖的合成.
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