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B型肉毒毒素重链C-端片段（BoNTB／Hc）经金属螫和层析法纯化后免疫Balb／c小鼠，从其脾淋巴细胞中提取总RNA，反转录成cDNA，用抗体可变区混合引物进行全套抗体重、轻链可变区基因的扩增，体外随机装配成单链抗体（scFv）。将其克隆至pCANTAB5E中，构建单链抗体噬菌体抗体库。结果表明经过4轮“吸附-洗脱-扩增”的富集过程，筛选获得高亲和力的克隆。序列测定符合抗体可变区结构特点。