【摘 要】
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以13份甲壳类动物过敏患者血清的Western-blotting分析,确定克氏原螯虾主要过敏原为36 ku蛋白质.通过盐析、等电点沉淀及热处理等方法纯化该蛋白质,以兔抗拟穴青蟹原肌球蛋白
【机 构】
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集美大学生物工程学院,福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(31171660);福建省自然科学基金资助项目(2010J06012);集美大学创新团队基金资助项目(2010A005);集美区社会发展科技计划项目(350211Z20105C01)
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以13份甲壳类动物过敏患者血清的Western-blotting分析,确定克氏原螯虾主要过敏原为36 ku蛋白质.通过盐析、等电点沉淀及热处理等方法纯化该蛋白质,以兔抗拟穴青蟹原肌球蛋白(Tropo-myosin,TM)多克隆抗体的Western-blotting分析,确定该蛋白质为TM.同源性分析表明,克氏原螯虾TM与南美白对虾TM、拟穴青蟹的氨基酸序列相似性较高(>90%).酶切位点预测显示,它分别有49个胰蛋白酶和6个胰凝乳蛋白酶的酶切位点.模拟胃肠液消化实验结果显示,纯化TM不易被胃蛋白酶降解,易于被胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶降解,进一步的Western-blotting和抑制性ELISA分析结果显示,其消化产物仍具有一定的免疫活性.采用蒸煮处理可降低TM的消化稳定性及免疫活性,且蒸煮处理时间越长,效果越显著.说明,TM为克氏原螯虾主要过敏原,与其他甲壳类动物TM的序列相似性较高.
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