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目的 探究结核分枝杆菌Ag85B的真核表达质粒pcD-Ag85B经肌肉免疫后对小鼠结肠黏膜SIgA及菌群的影响。方法 以pcDNA3.1+为真核表达载体，将信号肽基因和编码Ag85B的Rv1886c基因共963 bp核苷酸序列连接到pcDNA3.1+,构建真核表达质粒pcD-Ag85B。通过双酶切和测序鉴定无误后，将pcD-Ag85B重组质粒转染中国仓鼠卵巢癌细胞（CHO）并验证其表达。采用微针注射法将pcD-Ag85B重组质粒经大腿肌肉免疫C57BL/6J小鼠；初免后42 d收集小鼠粪便及结肠黏液进行16S RNA高通量测序和菌群结构分析，并测定SIgA特异性抗体效价。结果 成功构建真核表达质粒pcD-Ag85B并检测到Ag85B蛋白的特异性表达，蛋白相对分子质量约为35×10~3,与预期相符。一免疫后42 d, Ag85B组小鼠结肠厚壁菌门-乳杆菌属的罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）和约氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii）丰度与对照组相比显著增高（均P＜0.05）;肠粘膜SlgA效价为1∶4500。结论 成功获得表达Ag85B蛋白的真核表达质粒，用该质粒免疫能诱导小鼠结肠粘膜产生体液免疫效应，改善结肠益生菌-乳酸杆菌群丰度。