【摘 要】
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目的 建立可视化的环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)联合横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)方法检测肠出血性大肠杆菌(enterohemo
【机 构】
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江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,南京 210014江苏大学食品与生物工程学院,镇江 212013;江苏省动物疫病预防控制中心,南京,210024;江苏省农业科学院兽医
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目的 建立可视化的环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)联合横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)方法检测肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157:H7的分析方法.方法 以EHEC O157:H7的遗传标志性基因z3276基因序列为检测靶标设计6条LAMP特异性引物,其中2条环引物分别标记异硫氰酸荧光素和地高辛,用LFD检测扩增产物,建立EHEC O157:H7 LAMP-LFD检测方法.结果 所建立的检测方法能够特异性的检测EHEC O157:H7,与试验对照菌株EHEC O26、O145、O45、O121,及其他主要大肠杆菌血清型O25、O78、O103、O111、O127、O138、O139、O141,及禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)E058、 肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)SEC627、EPEC SEC689、K12-MG1655、BL21,和其他种属的受试菌,不存在交叉反应;对EHEC O157:H7纯培养物的最低检测限为1.3 CFU/mL.结论 本研究所建立的LAMP-LFD检测方法特异性和敏感性良好,操作简单,结果可视.
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