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目的：对高效液相色谱法（HPLC）测定氨咖黄敏胶囊中对乙酰氨基酚、咖啡因含量的测量不确定度进行评定。方法：建立HPLC同时测定氨咖黄敏胶囊中对乙酰氨基酚、咖啡因含量的方法，通过对测试方法流程进行分析，确定不确定度来源。结果：结合HPLC方法验证数据，计算合成不确定度及扩展不确定度。结论：通过不确定度评定，对测量过程中产生误差的关键环节有更深刻的认识，有利于进一步提高测量的准确性。