研究锌离子在炎症微环境下对小鼠成骨细胞成骨相关蛋白表达的影响,为治疗种植体周围炎,开发新型骨替代材料提供基础。
方法传代培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,以10 mg/L肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)建立炎症微环境模型,按不同锌离子浓度分为空白对照组、TNF-α组、A组(TNF-α+10-4 mol/L Zn2+)、B组(TNF-α+10-5 mol/L Zn2+)、C组(TNF-α+10-6 mol/L Zn2+)。培养72 h后检测各组细胞增殖能力,培养24、48、72 h后检测各组碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性。蛋白质印迹法检测培养72 h后各组骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、Osterix、NF-κB受体激活蛋白配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的蛋白表达量。
结果细胞24 h后贴壁生长,72 h后生长密集,细胞呈长梭形或不规则形。72 h后TNF-α、B、C组细胞增殖能力(分别为0.67±0.05、0.71±0.03和0.67±0.04)均显著低于空白对照组(0.80±0.03)(P<0.05);A组细胞增殖能力(0.82±0.06)与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。每组培养72 h时ALP活性均显著高于24、48 h(P<0.05)。培养72 h时TNF-α、B、C组ALP活性显著低于空白对照组(P<0.05),A组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。TNF-α、B、C组BMP-2、RUNX2、Osterix表达比空白对照组显著下降(P<0.05),而A组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。TNF-α、B、C组RANKL表达比空白对照组显著上升(P< 0.05),而A组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。
结论10-4 mol/L锌离子能显著提升TNF-α环境下小鼠成骨细胞中成骨相关蛋白ALP、BMP-2、RUNX2、Osterix表达,并降低RANKL表达。