猪圆环病毒2型Cap基因多拷贝质粒的构建及病毒样颗粒的表达

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通过构建多拷贝数表达质粒,获得高表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白Cap的毕赤酵母菌株。将Cap的基因克隆到pPIC3.5K载体中后,利用同尾酶技术将表达盒(5′AOX-Cap-TT)重复插入载体,分别构建了含有1、2、4、6个拷贝基因数的表达质粒并通过电转化导入KM71菌株,重组菌株经发酵和甲醇诱导,通过SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白的表达;绘制不同拷贝数重组菌株的生长曲线;表达产物经纯化后透射电镜观察是否组装形成病毒样颗粒(VLPs)并免疫小鼠评估其免疫原性。Western blot结
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