【摘 要】
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为探讨水牛抵抗革兰阴性菌感染的免疫机制,克隆、表达了水牛髓样分化蛋白-2(bMD-2)基因,并用Western blot进行鉴定.采用RT-PCR方法从水牛外周血白细胞中扩增bMD-2基因,构建pE
【机 构】
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海南大学农学院,海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室(筹),海口市动物基因工程重点实验室,海南海口570228华中师范大学生命科学学院,湖北武汉,430079;
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为探讨水牛抵抗革兰阴性菌感染的免疫机制,克隆、表达了水牛髓样分化蛋白-2(bMD-2)基因,并用Western blot进行鉴定.采用RT-PCR方法从水牛外周血白细胞中扩增bMD-2基因,构建pET28a-bMD-2表达载体,转化至大肠埃希菌BL21( DE3)中,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果显示,bMD-2基因含有一个483 bp的开放阅读框,编码161个氨基酸；37℃条件下,经1 mmol/LIPTG诱导表达6h后,His-bMD-2在E.coli BL21中表达量最高,并以包涵体的形式存在,融合蛋白的分子质量约为25 ku.结果表明水牛MD-2原核表达载体成功构建并表达,为继续深入对水牛MD-2基因功能的研究提供参考.
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