【摘 要】
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目的 应用转录激活因子样效应因子核酸酶(Talen)法制备载脂蛋白E(apoE基因敲除大鼠模型,为进一步研究apoE基因功能,动脉粥样硬化(AS)疾病发病机制及治疗方法奠定基础.方法 设
【机 构】
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中国医科大学实验动物部,南京徇齐生物技术有限公司
【基金项目】
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国家重大科技专项;辽宁省科技计划项目
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目的 应用转录激活因子样效应因子核酸酶(Talen)法制备载脂蛋白E(apoE基因敲除大鼠模型,为进一步研究apoE基因功能,动脉粥样硬化(AS)疾病发病机制及治疗方法奠定基础.方法 设计并合成针对大鼠apoE基因的Talen序列,应用原核显微注射方法制备子代鼠.通过PCR-测序及TA克隆-测序法检测仔鼠中apoE的突变,经传代及兄妹交配获得纯合型仔鼠,并对其基因型进行鉴定.应用Western blot方法检测apoE/-仔鼠各组织中ApoE蛋白表达水平;血清学分析血脂总胆固醇(CHO)及-甘-油三酯(TG)含量;应用RT-PCR方法检测脂质代谢相关基因三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达.结果 经鉴定选取在第二外显子处缺失1bp,造成开放阅读框移码突变的大鼠为阳性F0代仔鼠,该鼠经传代及筛选,最终获得apoE-/-大鼠.Western blot检测显示apoE-/-鼠在心、肝、肾、脑、卵巢组织中未见ApoE蛋白的表达,表明在该模型中成功实现了apoE基因的敲除.apo,E-/-鼠血脂CHO、TG均高于野生SD大鼠,其中CHO水平呈现显著性差异(P＜0.05).在apoE-/-鼠肝组织中ABCA1的表达降低,可能起到促进AS形成的作用.结论 应用Talen法成功制备apoE基因敲除SD大鼠;经筛选获得了纯合型apoE-/-大鼠,该模型实现了apoE 基因敲除,并表现为高血脂及AS性状.
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