【摘 要】
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目的 探讨在上皮细胞生长因子(EGF)作用下,用悬浮培养法富集结肠癌肿瘤干细胞的最佳培养时间.方法 在含20 ng/mL EGF的无血清培养基中,悬浮培养人结肠癌DLD-1细胞获取球细胞,
【机 构】
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川北医学院附属医院肝胆外科二 四川南充637000;川北医学院转化医学中心 四川南充637000;川北医学院附属医院肿瘤干细胞研究中心 四川南充637000
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目的 探讨在上皮细胞生长因子(EGF)作用下,用悬浮培养法富集结肠癌肿瘤干细胞的最佳培养时间.方法 在含20 ng/mL EGF的无血清培养基中,悬浮培养人结肠癌DLD-1细胞获取球细胞,设置时间梯度为10d、20 d、30 d及40 d.采用流式细胞术(FCM)检测球细胞中CD133+、CD44+和CD133+CD44+细胞的比例;采用成球实验和有限稀释法检测细胞球的自我更新能力,平板克隆形成实验检测细胞体外成瘤能力.结果 流式细胞术检测结果显示:30d组球细胞中CD133+及CD 133+CD44+细胞的比例较其他组明显增多(均P＜0.05),其CD44+细胞的比例高于20 d组(P＜0.05),但与另外2组的差异无统计学意义(P＞0.05).有限稀释法和平板克隆形成实验中,30d组或40d组的数量最高,2组比较差异无统计学意义(P＞0.05),30d组与10d及20d组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).成球实验中,30 d组细胞球自我更新能力较其他组明显增强(均P＜0.05).结论 在20 ng/mL EGF悬浮培养30d可最大效率地富集结肠癌DLD-1肿瘤干细胞.
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