应用抑制性消减杂交技术筛选甘草酸苷下调大鼠肝星状细胞的靶基因

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目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建甘草酸苷处理的大鼠肝星状细胞(HSC)下调基因的cDNAs消减文库,从分子生物学角度阐明甘草酸苷治疗肝硬化的作用机制。方法以未用甘草酸苷处理的HSC作为对照组,同时以甘草酸苷作用的相同细胞系作为实验组;24h后制备细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNAs,经Rsa I酶切后。将时照组cDNAs分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与实验组cDNAs进行两次消减杂交及两次抑制性多聚酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNAs消减文库,并转染大肠埃希菌
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