【摘 要】
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目的 基于环介导恒温扩增结合纳米生物传感技术（loop-mediated isothermal amplification combined with nanoparticle-based lateral flow biosensor, LAMP-LFB）对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA）快速、准确、便捷检
【机 构】
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贵州中医药大学第二附属医院临床医学实验室
【基金项目】
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贵州省科技支撑计划项目[黔科合支撑（2020）4Y184]； 国家级大学生创新训练计划项目[贵中医大创合字（2020）3号]； 贵州省卫生健康委科学技术基金项目[gzwjkj2017-1-064]；
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目的 基于环介导恒温扩增结合纳米生物传感技术（loop-mediated isothermal amplification combined with nanoparticle-based lateral flow biosensor, LAMP-LFB）对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA）快速、准确、便捷检测技术的构建及应用评价。方法 以MRSA菌株特异性基因mec A为检测靶点，设计并修饰LAMP引物。采用实时浊度仪、孔雀石绿扩增指示剂（Malachite green, MG）及纳米生物传感器（nanoparticlebased lateral flow biosensor, LFB）为检测手段对LAMP扩增产物进行鉴定。对MRSA-LAMP-LFB检测体系的扩增温度和扩增时间进行优化，分析MRSA-LAMP-LFB检测方法灵敏性和特异性。应用微生物培养技术，PCR技术和新构建的MRSA-LAMP-LFB方法分别对48份临床疑似MRSA感染患者全血样本进行检测，进而评价MRSA-LAMPLFB技术的临床应用性。结果 MRSA-LAMP-LFB技术优化后的反应条件为67℃，40 min。该技术的检测结果可直接通过观察LFB板条上的CL和TL条带显色进行结果判定。该技术的灵敏度为100 fg/μl（32 copies/μl），其检测特异性为100%，与非MRSA菌株无交叉反应。经临床样本验证，LAMP-LFB技术对MRSA的检测结果与传统的“细菌培养-药敏鉴定”检测结果一致，其灵敏度高于传统的PCR方法。结论 基于LAMP和LFB技术建立的MRSA-LAMP-LFB检测方法特异性强、灵敏度高，能准确、快速地检测MRSA菌株，能为临床用药和MRSA防控提供准确、快速的实验室诊断依据。
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