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【摘要】目的 探讨疏肝消脂颗粒剂的质量控制标准,提高临床用药的效率和安全性。方法 制备颗粒剂是采用了水提纯沉法,白芍、泽泻、茯苓、山药、赤芍等共125g,加8倍量水煎煮2次,进行煎液滤过,滤液浓缩至每1ml相当于药材2g,加入浓缩液1倍量的乙醇,搅匀,静置24h,滤过,药液备用。对方中白芍与赤芍及佛手以薄层色谱法进行鉴别,取本品1g,加甲醇10ml使溶解,超声处理30min,取出,放冷,滤过,续滤液挥干,用1ml乙醇溶液作为供试品溶液。采用高效液相色谱法颗粒剂中芍药苷含量进行测定。结果 在白芍、赤芍供试品,芍药苷对照品,白芍、赤芍对照药材中分别都有相同斑点显示,阴性对照对此无干扰;能提取出佛手中的有效成分,特征斑点明显;高效液相色谱测得总芍药苷含量为34.585mg/g。结论 本疏肝消脂颗粒剂制备工艺合理可行,剂制备工艺合理科学,质量标准方法简便,专属性强,鉴别方法可靠,可以用于疏肝消脂颗粒的质量控制。
【关键词】疏肝消脂颗粒制备工艺质量控制
【中图分类号】R283 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2010)08-0-02
【Abstract】Objective To investigate the Shugan quality control standards,Improve clinical efficiency and safety of drugs.Methods Preparation of granules are used in water purification precipitation, white peony root, Alisma, Poria, Chinese yam, red peony, etc. A total of 125 g, plus 8 times the amount of boiling water 2 times, to fry liquid filtration, the filtrate was concentrated to 1ml per the equivalent of herbs 2 g, 1-fold concentrated solution by adding ethanol, mix, standing 24 h, filtration, liquid reserve. Each other in the Alba and Radix and bergamot to TLC for identification, goods from the 1 g, add 10 ml of methanol Shirong Jie, ultrasonic treatment 30min, take out, let cool, filtered, evaporated the filtrate added with 1 ml ethanol solution as the sample solution. Granules by HPLC paeoniflorin were determined. Results peony root, red peony root for the test sample, paeoniflorin reference substance, white peony root, Radix control medicines have the same spots, respectively, showed no interference with this negative control; to extract the active ingredient in the hands of the Buddha, feature spots marked ; measured by HPLC paeoniflorin content of total 34.585 mg / g. Conclusion Shugan preparation reasonably practicable, reasonable and scientific agent preparation, quality standard method is simple, specific, and reliable identification method can be used for quality control of Shugan.
【Key words】Shugan; preparation process; quality control
疏肝消脂颗粒由白芍、赤芍、泽泻、茯苓、山药、佛手等多味药物组成,是在中医理论指导下以健脾化湿,化瘀降脂为治疗原则配伍中药材形成的中药复方制剂,用于高血脂治疗,疗效明显。按现代中药工艺制备方法及质量控制原则,研究疏肝消脂颗粒剂制备工艺及建立质量控制,现将报告如下。
1 实验材料
1.1 药材与对照品
药材购自广州市药材公司,经鉴定药材为正品。芍药苷对照品,批号10736-200527,中国药品生物制品检定所,供含量测定和鉴别用。
1.2 试剂
硅胶G、羧甲基纤维素购自青岛海洋化工厂20070409:三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、甲酸、环己烷、乙醇等,分析纯,购自天津市大茂化学试剂厂,20070404。甲醇,乙腈等色谱纯,为天津市科密欧化学试剂公司,20070205。
1.3 仪器
LC-10AT型液相色谱仪泵主机(日本岛津)、SPD-10A型紫外检测器(日本岛津);N-2000色谱工作站(浙江大学智达公司);万分之一电子天平(美国PE公司)。
2 实验方法
2.1 制备工艺
白芍、泽泻、茯苓、山药、赤芍等共125g,加8倍量水煎煮2次,第1次2h,第2次1.5h,进行煎液滤过,滤液浓缩至每1ml相当于药材2g,加入浓缩液1倍量的乙醇,搅匀,静置24h,滤过,药液备用。佛手9g用15倍原料重30%乙醇溶液,在80℃条件下,超声提取2h,放冷,用干燥滤器过滤,减压回收乙醇,备用。合并上述两液,滤液减压回收乙醇,浓缩至相对密度为1.25~1.30(80℃)清膏。取清膏1份,糊精1.3份,制成颗粒,干燥,即得。
2.2 薄层色谱鉴别
2.2.1 白芍与赤芍鉴别
取本品1g,加甲醇10ml使溶解,超声处理(功率300W,频率50kHz)30min,取出,放冷,滤过,续滤液挥干,用1ml乙醇溶液作为供试品溶液。取缺白芍、赤芍颗粒同法制成阴性对照溶液。分别取白芍、赤芍药材粉末0.5g,同法制成对照药材溶液。取芍药苷对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法实验,吸取上述3种溶液各10μ,l分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品和对照药材色谱相应位置,显相同颜色斑点。阴性无干扰。
2.2.2佛手鉴别
取颗粒研细,取粉末1g,加无水乙醇10m,l超声处理20min,滤过,滤液浓缩至干,加无水乙醇0.5ml使溶解,为供试品溶液。同时取佛手对照药材同法制成对照药材溶液。取缺佛手阴性对照颗粒1g,同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法实验,吸取上述三种溶液各5~10μ,l分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(3∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品和对照药材色谱相应位置,显相同颜色斑点。阴性无干扰。
2.3 高效液相色谱测定总芍药苷含量
2.3.1 色谱条件
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱(4.6×250mm,5μm):流动相:乙腈-水(13:87):流速:0.8ml/min:检测波长:230nm:理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。
2.3.2 对照品溶液制备
精密称取芍药苷对照品适量,用稀乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液,为对照品溶液。
2.3.3 供试品溶液制备
精密量取取本品细粉1g,置具塞锥形瓶中,精密加入稀乙醇50m,l密塞,称定重量,超声处理(功率300W,频率50kHz)30min,取出,放冷,再称定重量,用稀乙醇溶解补足减失的重量,摇匀,静置,取上清液滤过,取续滤液,为供试品溶液。
2.3.4 阴性对照溶液制备
按供试品的制备方法
制备阴性对照溶液。按照高效液相色谱法分别精密吸取对照溶液与供试品溶液各10μ,l注入液相色谱仪,测定,即得。
3 实验结果
3.1 薄层色谱鉴别药材
3.1.1 白芍与赤芍鉴别结果,见图1。
图上标号1开始向右分别是白芍和赤芍供试品,图上标号1开始向右分别是供试品芍药苷对照品,阴性对照,白芍、赤芍对照药材。佛手对照药材,佛手阴性对照。图中斑点表明在白芍、赤芍供试品,芍药苷对照品,白芍、赤芍对照药材中分别都有相同斑点显示,阴性对照对此无干扰。说明本方法能提取出白芍、赤芍中的芍药苷,并能成功鉴别。
3.1.2 佛手鉴别结果,见图2。
图中斑点表明在佛手供试品、佛手对照药材中分别都有相同荧光斑点显示,阴性对照对此无干扰。说明本方法能提取出佛手中的有效成分,特征斑点明显。
3.2 高效液相色谱测定颗粒中总芍药苷含量
测得芍药苷对照品的保留时间是19.684min,峰面积为1144144:测得芍药苷保留时间为19.633min,峰面积为1204827。阴性对照无干扰。利用外标法测定总芍药苷含量为34.585mg/g。
4 讨论
疏肝消脂颗粒剂处方药物,主要成分都具有水溶性,故采用水提醇沉法提取。经醇沉优选工艺实验分析,浓缩药液的相对密度对精制后总固体得率和芍药苷的质量分数影响较大,药液的相对密度不同时,相同的醇沉体积分数、精制液的总固体得率和芍药苷质量分数相差较大。采用醇沉体积分数为50%的醇沉工艺,总固体得率和芍药苷质量分数较高,有利于降低生产成本。
本研究建立疏肝消脂颗粒中白芍与赤芍及佛手薄层色谱法鉴别方法,具有专属性强,特征斑点明显的特点,可以较好地控制自拟疏肝消脂颗粒的质量。同时也可以为含有以上三味药的其他成分制剂定性鉴别提供参考之用。芍药苷鉴别颗粒剂中是否存在芍药苷,白芍与赤芍药材对照是以鉴别出药材中都含有芍药苷,说明提取方法能从白芍和赤芍中提出芍药苷。由于白芍、赤芍中都含有芍药苷,检测出来的是芍药苷的总含量。该制剂制备工艺合理科学,质量标准方法简便,专属性强,可作为本品的质量控制方法。
参考文献
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典.化学工业出版社.2005附录VIB:31-34.
[2]沈雪梅,何伟,李勇.复方芍甘颗粒的提取与精制工艺研究.中草药,27(6):868-869.
[3]吴静,王燕. 探讨抗乙肝颗粒剂制备工艺和质控标准[J].实用医技杂志,2005,(22)78-80.
[4]罗红梅.康脑舒口服液的制备工艺及质量控制[J].临床和实验医学杂志,2006,(11),112-114.
作者单位:耒阳市中医院中药科421800
【关键词】疏肝消脂颗粒制备工艺质量控制
【中图分类号】R283 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2010)08-0-02
【Abstract】Objective To investigate the Shugan quality control standards,Improve clinical efficiency and safety of drugs.Methods Preparation of granules are used in water purification precipitation, white peony root, Alisma, Poria, Chinese yam, red peony, etc. A total of 125 g, plus 8 times the amount of boiling water 2 times, to fry liquid filtration, the filtrate was concentrated to 1ml per the equivalent of herbs 2 g, 1-fold concentrated solution by adding ethanol, mix, standing 24 h, filtration, liquid reserve. Each other in the Alba and Radix and bergamot to TLC for identification, goods from the 1 g, add 10 ml of methanol Shirong Jie, ultrasonic treatment 30min, take out, let cool, filtered, evaporated the filtrate added with 1 ml ethanol solution as the sample solution. Granules by HPLC paeoniflorin were determined. Results peony root, red peony root for the test sample, paeoniflorin reference substance, white peony root, Radix control medicines have the same spots, respectively, showed no interference with this negative control; to extract the active ingredient in the hands of the Buddha, feature spots marked ; measured by HPLC paeoniflorin content of total 34.585 mg / g. Conclusion Shugan preparation reasonably practicable, reasonable and scientific agent preparation, quality standard method is simple, specific, and reliable identification method can be used for quality control of Shugan.
【Key words】Shugan; preparation process; quality control
疏肝消脂颗粒由白芍、赤芍、泽泻、茯苓、山药、佛手等多味药物组成,是在中医理论指导下以健脾化湿,化瘀降脂为治疗原则配伍中药材形成的中药复方制剂,用于高血脂治疗,疗效明显。按现代中药工艺制备方法及质量控制原则,研究疏肝消脂颗粒剂制备工艺及建立质量控制,现将报告如下。
1 实验材料
1.1 药材与对照品
药材购自广州市药材公司,经鉴定药材为正品。芍药苷对照品,批号10736-200527,中国药品生物制品检定所,供含量测定和鉴别用。
1.2 试剂
硅胶G、羧甲基纤维素购自青岛海洋化工厂20070409:三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、甲酸、环己烷、乙醇等,分析纯,购自天津市大茂化学试剂厂,20070404。甲醇,乙腈等色谱纯,为天津市科密欧化学试剂公司,20070205。
1.3 仪器
LC-10AT型液相色谱仪泵主机(日本岛津)、SPD-10A型紫外检测器(日本岛津);N-2000色谱工作站(浙江大学智达公司);万分之一电子天平(美国PE公司)。
2 实验方法
2.1 制备工艺
白芍、泽泻、茯苓、山药、赤芍等共125g,加8倍量水煎煮2次,第1次2h,第2次1.5h,进行煎液滤过,滤液浓缩至每1ml相当于药材2g,加入浓缩液1倍量的乙醇,搅匀,静置24h,滤过,药液备用。佛手9g用15倍原料重30%乙醇溶液,在80℃条件下,超声提取2h,放冷,用干燥滤器过滤,减压回收乙醇,备用。合并上述两液,滤液减压回收乙醇,浓缩至相对密度为1.25~1.30(80℃)清膏。取清膏1份,糊精1.3份,制成颗粒,干燥,即得。
2.2 薄层色谱鉴别
2.2.1 白芍与赤芍鉴别
取本品1g,加甲醇10ml使溶解,超声处理(功率300W,频率50kHz)30min,取出,放冷,滤过,续滤液挥干,用1ml乙醇溶液作为供试品溶液。取缺白芍、赤芍颗粒同法制成阴性对照溶液。分别取白芍、赤芍药材粉末0.5g,同法制成对照药材溶液。取芍药苷对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法实验,吸取上述3种溶液各10μ,l分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品和对照药材色谱相应位置,显相同颜色斑点。阴性无干扰。
2.2.2佛手鉴别
取颗粒研细,取粉末1g,加无水乙醇10m,l超声处理20min,滤过,滤液浓缩至干,加无水乙醇0.5ml使溶解,为供试品溶液。同时取佛手对照药材同法制成对照药材溶液。取缺佛手阴性对照颗粒1g,同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法实验,吸取上述三种溶液各5~10μ,l分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(3∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品和对照药材色谱相应位置,显相同颜色斑点。阴性无干扰。
2.3 高效液相色谱测定总芍药苷含量
2.3.1 色谱条件
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱(4.6×250mm,5μm):流动相:乙腈-水(13:87):流速:0.8ml/min:检测波长:230nm:理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。
2.3.2 对照品溶液制备
精密称取芍药苷对照品适量,用稀乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液,为对照品溶液。
2.3.3 供试品溶液制备
精密量取取本品细粉1g,置具塞锥形瓶中,精密加入稀乙醇50m,l密塞,称定重量,超声处理(功率300W,频率50kHz)30min,取出,放冷,再称定重量,用稀乙醇溶解补足减失的重量,摇匀,静置,取上清液滤过,取续滤液,为供试品溶液。
2.3.4 阴性对照溶液制备
按供试品的制备方法
制备阴性对照溶液。按照高效液相色谱法分别精密吸取对照溶液与供试品溶液各10μ,l注入液相色谱仪,测定,即得。
3 实验结果
3.1 薄层色谱鉴别药材
3.1.1 白芍与赤芍鉴别结果,见图1。
图上标号1开始向右分别是白芍和赤芍供试品,图上标号1开始向右分别是供试品芍药苷对照品,阴性对照,白芍、赤芍对照药材。佛手对照药材,佛手阴性对照。图中斑点表明在白芍、赤芍供试品,芍药苷对照品,白芍、赤芍对照药材中分别都有相同斑点显示,阴性对照对此无干扰。说明本方法能提取出白芍、赤芍中的芍药苷,并能成功鉴别。
3.1.2 佛手鉴别结果,见图2。
图中斑点表明在佛手供试品、佛手对照药材中分别都有相同荧光斑点显示,阴性对照对此无干扰。说明本方法能提取出佛手中的有效成分,特征斑点明显。
3.2 高效液相色谱测定颗粒中总芍药苷含量
测得芍药苷对照品的保留时间是19.684min,峰面积为1144144:测得芍药苷保留时间为19.633min,峰面积为1204827。阴性对照无干扰。利用外标法测定总芍药苷含量为34.585mg/g。
4 讨论
疏肝消脂颗粒剂处方药物,主要成分都具有水溶性,故采用水提醇沉法提取。经醇沉优选工艺实验分析,浓缩药液的相对密度对精制后总固体得率和芍药苷的质量分数影响较大,药液的相对密度不同时,相同的醇沉体积分数、精制液的总固体得率和芍药苷质量分数相差较大。采用醇沉体积分数为50%的醇沉工艺,总固体得率和芍药苷质量分数较高,有利于降低生产成本。
本研究建立疏肝消脂颗粒中白芍与赤芍及佛手薄层色谱法鉴别方法,具有专属性强,特征斑点明显的特点,可以较好地控制自拟疏肝消脂颗粒的质量。同时也可以为含有以上三味药的其他成分制剂定性鉴别提供参考之用。芍药苷鉴别颗粒剂中是否存在芍药苷,白芍与赤芍药材对照是以鉴别出药材中都含有芍药苷,说明提取方法能从白芍和赤芍中提出芍药苷。由于白芍、赤芍中都含有芍药苷,检测出来的是芍药苷的总含量。该制剂制备工艺合理科学,质量标准方法简便,专属性强,可作为本品的质量控制方法。
参考文献
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典.化学工业出版社.2005附录VIB:31-34.
[2]沈雪梅,何伟,李勇.复方芍甘颗粒的提取与精制工艺研究.中草药,27(6):868-869.
[3]吴静,王燕. 探讨抗乙肝颗粒剂制备工艺和质控标准[J].实用医技杂志,2005,(22)78-80.
[4]罗红梅.康脑舒口服液的制备工艺及质量控制[J].临床和实验医学杂志,2006,(11),112-114.
作者单位:耒阳市中医院中药科421800