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探明体外保存过程中精子的损伤机制对精液体外保存效果的提高具有重要意义。因此,通过研究旨在探讨不同温度及稀释液对保存过程中精子结构及功能的影响。采用联合荧光染色方法,用流式细胞仪分别对Ⅰ液(葡萄糖-卵黄-蔗糖-柠檬酸钠)(17℃和4℃)和Ⅱ液(葡萄糖-卵黄-蔗糖)(17℃)保存条件下的猪精子的质膜、顶体及线粒体的功能进行检测。结果表明,Ⅰ液保存条件下,17℃保存组的精子质膜完整率[5 d,(83.07±1.64)%]、活精子质膜磷脂酰丝氨酸(PS)未外翻比率[5 d,(84.00±2.64)%]、活精子顶体完整率[5 d,(76.72±1.07)%]和活精子高能线粒体比率[5 d,(52.01±0.37)%]显著高于4℃保存组[5 d,(21.84±0.49)%;5 d,(16.53±1.67)%;5 d,(15.44±1.25)%;5 d,(12.02±0.36)%](P<0.01);17℃保存条件下,Ⅱ液保存的精子质膜完整率[5 d,(85.24±2.66)%]、活精子高能线粒体比率[(5 d,(58.93±0.65)%]和活精子PS未外翻的比率[5 d,(87.86±0.88)%]显著优于Ⅰ液[5 d,(83.07±1.64)%;5 d,(52.01±0.37)%;5 d,(84.00±2.64)%],但在活精子顶体完整率方面[Ⅱ液,5 d,(80.57±0.52)%;Ⅰ液,5 d,(76.72±1.07)%]两者差异不显著(P﹥0.05)。可得出结论:精液体外保存过程中,精子的质膜、顶体和线粒体功能随保存时间的增加而降低;4℃比17℃保存对精子质膜、顶体和线粒体结构损伤更大;在精子质膜、顶体和线粒体方面,Ⅱ液比Ⅰ液具有更好的体外保护效果。