【摘 要】
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在马的免疫学研究领域中，由于目前市场上缺乏商业化的马IgG单克隆抗体，使得对马的B淋巴细胞的研究受到了很大的阻碍，IgG是B细胞受体（BCR）的重要构成成分，与B细胞分化成熟相关。为了获得马IgG特异性的单克隆抗体，利用单个B淋巴细胞扩增技术进行抗体的筛选。首先，将马IgG蛋白（EqIgG1-C）密码子优化后合成在真核表达载体pcDNA3.4上，纯化出抗原蛋白。随后，使用蛋白免疫小鼠，分离脾细胞后
【机 构】
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生命科学技术学院细胞生物学系暨南大学
【基金项目】
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兽医生物技术国家重点实验室开放课题基金（SKLVBF2017）；
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在马的免疫学研究领域中，由于目前市场上缺乏商业化的马IgG单克隆抗体，使得对马的B淋巴细胞的研究受到了很大的阻碍，IgG是B细胞受体（BCR）的重要构成成分，与B细胞分化成熟相关。为了获得马IgG特异性的单克隆抗体，利用单个B淋巴细胞扩增技术进行抗体的筛选。首先，将马IgG蛋白（EqIgG1-C）密码子优化后合成在真核表达载体pcDNA3.4上，纯化出抗原蛋白。随后，使用蛋白免疫小鼠，分离脾细胞后利用流式细胞术分离特异性单个B淋巴细胞，扩增出抗体重链和轻链的可变区基因，并用overlapping PCR的方法扩增出线性化的完整抗体，并进行鉴定。结果从80个B细胞中获得了27株特异性重组单克隆抗体，并挑选出3株线性结合活性最强的抗体基因构建到表达载体上，共转染Expi293FTM细胞后表达纯化，经过ELISA和western blot验证，显示获得的抗体可以和EqIgG1-C蛋白有良好的结合作用。使用该方法可以省时高效的获得了特异性抗体，为马的免疫学研究提供了重要研究工具，为鼠单克隆抗体筛选提供了技术拓展。
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