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用动物实验证实了普鲁卡因的镇痛、镇静和致惊作用。小鼠热板法测得普鲁卡因的镇痛ED50为21.7mg/kg（iv）和52.8µg／只（icv）；电刺激法之镇痛ED50为29.2mg/kg（iv）和52.2µg／只（icv）。普鲁卡因可增强阈下催眠剂量戊巴比妥钠对小鼠和兔的催眠作用，但不能减少小鼠的自主活动。普鲁卡因对兔之惊厥ED50分别为13.5mg/kg（iv）和2.4mg/只（icv）。单独iv或icv普鲁卡因不能使全部实验动物翻正反射消失。这些结果显示普鲁卡因的镇痛、镇静作用是较弱的，普鲁卡因只有和其它药物合用，才能产生满意的麻醉效果。