【摘 要】
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目的 对新型冠状病毒核酸释放剂一步提取法进行优化,提高内标在荧光定量逆转录PCR中的检出效率,降低因内标未检出带来的复查率,提高核酸检测报告时效性.方法 对深圳市宝安中
【机 构】
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深圳市宝安中医院(集团)检验科,广东深圳518133
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目的 对新型冠状病毒核酸释放剂一步提取法进行优化,提高内标在荧光定量逆转录PCR中的检出效率,降低因内标未检出带来的复查率,提高核酸检测报告时效性.方法 对深圳市宝安中医院PCR实验室的新型冠状病毒核酸检测标本,采用本实验室优化方法用释放剂一步法提取核酸,与试剂盒说明书原方法进行比较,观察两种方法提取核酸后内标扩增曲线及Ct值的不同;比较前后复查率改变.结果 优化前,各样本内标扩增曲线在Ct 24～44之间散在分布,部分样本内标未出现扩增曲线.经优化后,各样本内标的扩增曲线集中在Ct 22～34之间,且全部呈现典型“S”型曲线;各样本内标的扩增起始循环Ct值明显小于优化前(t=5.937 0,P＜0.01),同时优化前后阳性对照N基因及rnORF1a/基因的Ct值差异无统计学意义(P＞0.05);优化前后,阳性质评标本N基因(F=1.032,P=0.970 1)与ORF1a/b基因(F=1.262,P=0.784 8),Ct值差异均无统计学意义(P＞0.05).优化后样本总体复查率较优化前显著降低(F=3.899 0,P=0.025 8).结论 优化后的一步法提取核酸方法简单、便捷、用时短,在不影响新型冠状病毒阳性标本N基因及ORF1a/b基因Ct值的同时,内标检出结果明显优化,降低了复查率,缩短了报告发放时限,提高检测效率.
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