【摘 要】
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为研制更加安全的大肠杆菌疫苗株，并将其开发为新型活疫苗载体，本研究采用电转化将氯霉素抗性基因片段转化至益生菌EP株。采用同源重组技术使氯霉素抗性基因的PCR产物通过其两
【机 构】
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扬州大学兽医学院,江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,中华人民共和国荣成出入境检验检疫局,江苏省连云港市畜牧兽医站
【基金项目】
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江苏省重点研发计划(现代农业)BE2017342;国家自然科学基金(31672579,31270171、31072136、31502075、30771603);江苏省自然科学基金(BK20150442);江苏高校优势学科建设工程资助项目;课题号连云港市科技攻关项目(CN1505)
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为研制更加安全的大肠杆菌疫苗株，并将其开发为新型活疫苗载体，本研究采用电转化将氯霉素抗性基因片段转化至益生菌EP株。采用同源重组技术使氯霉素抗性基因的PCR产物通过其两侧asd基因序列与益生菌EP基因组中的asd基因发生同源重组。通过氯霉素抗性平板筛选得到阳性克隆，对筛选得到的阳性克隆再导入编码Flp重组酶的质粒pCP20以去除抗性基因，从而构建成EP△asd突变株。该缺失突变株可以与表达链球菌asd基因的质粒形成功能性互补，转化有上述质粒的EP△asd突变株可长时间定居于仔猪肠道。本研究为进一步开发以益
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