论文部分内容阅读
目的 观察应用小干扰RNA(siRNA)技术沉默上皮间质转化因子(Twist)对SGC7901胃癌细胞上皮间质转化(EMT)过程及顺铂耐药性的影响.方法 以脂质体转染法将Twist-siRNA、对照siRNA转染至SGC7901细胞,设为siRNA组和N-siRNA组,对照组未给予任何处理,检测各组Twist mRNA和蛋白表达情况及细胞增殖、迁移、侵袭情况.测定不同浓度顺铂(6.25×10-2,0.125,0.25,0.50,1.00 mg·L-1)对细胞的生长抑制率及顺铂对细胞的半数抑制浓度(IC50).以0.50 mg·L-1顺铂干预SGC7901细胞为顺铂组,以0.50 mg·L-1顺铂干预稳定转染Twist-siRNA的SGC7901细胞为siRNA+顺铂组,检测各组上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vinentin)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)mRNA和蛋白及磷酸化AKT(pAKT)蛋白表达情况.结果 siRNA组Twist mRNA及蛋白相对表达量、MTT实验不同时刻OD值均低于对照组和N-siRNA组(均P<0.05).siRNA组、对照组和N-siRNA组的迁移率分别为(68.11±6.42)％,(82.16±6.65)％和(85.50±6.25)％;穿膜细胞数分别为(46.67±4.64),(127.67±9.39)和(131.33±8.96)个;顺铂对细胞的IC50值分别为(0.19±0.01),(0.50±0.05)和(0.51±0.05)mg·L-1,siRNA组均显著低于对照组和N-siRNA组(均P<0.05).siRNA组、顺铂组、siRNA+顺铂组E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量均高于对照组;siRNA组、顺铂组、siRNA+顺铂组Vinentin、PI3K mRNA和蛋白相对表达量及pAKT/AKT均低于对照组(均P<0.05);与siRNA组、顺铂组比较,siRNA+顺铂组E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量均升高,Vinentin、PI3K mRNA和蛋白相对表达量及pAKT/AKT均降低(均P<0.05).结论 Twist-siRNA可阻断SGC7901胃癌细胞EMT过程,降低细胞对顺铂的耐药性,可能与上调E-cadherin mRNA和蛋白表达,下调Vinentin、PI3K mRNA和蛋白表达,抑制AKT磷酸化相关.