甘草苷对中波紫外线诱导人皮肤角质形成细胞凋亡的影响

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目的:研究甘草苷对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T)凋亡的影响。方法:以不同浓度的甘草苷作用于Ha Ca T细胞,噻唑蓝(MTT)比色法筛选甘草苷的有效安全浓度;用30 m J·cm-2的UVB作用于Ha Ca T细胞,建立光老化模型,MTT比色法检测光老化Ha Ca T细胞增殖率;流式细胞术检测各组细胞中活性氧自由基(ROS)含量和总凋亡率;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测光老化Ha Ca T细胞中半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3),半胱氨酸天冬氨酸-9(Caspase-9)mRNA表达水平;蛋白免疫印记法(Western blot)检测光老化Ha Ca T细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量。结果:筛选出甘草苷的最佳有效安全浓度为1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1。与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P<0.01),细胞中ROS含量和总凋亡率显著升高(P<0.01),Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达水平显著升高(P<0.01);Bcl-2蛋白表达量显著降低(P<0.01),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与UVB组比较,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1甘草苷+UVB组细胞增殖率显著升高(P<0.01);细胞中ROS含量和总凋亡率显著降低(P<0.05,P<0.01),Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01);Bcl-2蛋白表达量显著升高(P<0.05,P<0.01),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:甘草苷能通过促进抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,减少促凋亡相关细胞因子Caspase-3,Caspase-9 mRNA和蛋白的表达,从而抑制UVB诱导的Ha Ca T细胞凋亡。
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