【摘 要】
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目的 利用DNA聚合酶适配子Trnc A-30进行热启动, 提高定量PCR检测死亡受体5(death receptor 5,DR5)的灵敏度.方法 Trnc A-30组、抗体对照组和非热启动对照组分别进行定量PCR
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目的 利用DNA聚合酶适配子Trnc A-30进行热启动, 提高定量PCR检测死亡受体5(death receptor 5,DR5)的灵敏度.方法 Trnc A-30组、抗体对照组和非热启动对照组分别进行定量PCR,制作标准曲线,以复相关系数(r2)大于0.99为线性范围,比较其线性范围下限.结果 非热启动定量PCR对DR5的检测线性范围下限为105 copies/μl,而适配子Trnc A-30对DR5的检测线性范围下限为103 copies/μl,与DNA聚合酶抗体方法灵敏度相当.熔解曲线分析表明,在扩增高浓度靶分子(105 copies/μl)时,各种方法的非特异扩增均不明显,没有形成明显的非特异峰;在扩增低浓度靶分子(103 copies/μl)时,非热启动对照组特异扩增明显,产生明显的非特异峰,而DNA聚合酶适配子Trnc A-30可以明显消除非特异扩增而形成的非特异峰,从而提高检测的灵敏度.结论 DNA聚合酶适配子Trnc A-30可以提高定量PCR的检测灵敏度.
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