【摘 要】
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目的建立佐剂型关节炎大鼠滑膜成纤维细胞(AAFLS)原代培养方法及其特性分析,探讨AA-FLS作为RA体外研究细胞模型的可行性。方法采用热杀死结核分枝杆菌H37Ra(Mtb)免疫SD大鼠,
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目的建立佐剂型关节炎大鼠滑膜成纤维细胞(AAFLS)原代培养方法及其特性分析,探讨AA-FLS作为RA体外研究细胞模型的可行性。方法采用热杀死结核分枝杆菌H37Ra(Mtb)免疫SD大鼠,建立佐剂型关节炎大鼠模型,取大鼠双侧膝关节滑膜组织进行原代细胞培养,显微镜下观察细胞形态;免疫细胞化学方法鉴定细胞;CCK-8法检测细胞增殖活性;ELISA方法测定细胞上清中TNF-α和IL-1β水平;Hochest 33258法检测细胞凋亡状态;Western bolt方法检测AA FLS细胞线粒体凋亡通路重要调控蛋白Bcl-2和Bax及Pro-caspase-3和Cleave-caspase-3水平的表达。结果胶原酶法分离获得的滑膜成纤维细胞经传代纯化,呈梭形的细胞占0.95以上,免疫细胞化学鉴定显示滑膜成纤维细胞vimentin表达呈阳性,CD68表达为阴性;AA模型大鼠滑膜成纤维细胞增殖活性较正常大鼠滑膜成纤维细胞增殖活性明显提高,细胞凋亡率降低;在培养的细胞上清中TNF-α和IL-1β水平明显升高;线粒体凋亡通路调控蛋白Bcl-2水平明显升高,而Bax蛋白表达水平明显降低,同时AA-FLS细胞中pro-caspase-3表达量增加。结论 AA-FLS具有增殖活跃、凋亡抑制和分泌高水平促炎性细胞因子的生物特性,可作为体外筛选抗RA药物的细胞模型。
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