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采用TaqMan方法，根据古典狂犬病病毒非编码区及N基因编码区序列，设计合成多对引物和多条探针，通过对引物、探针的筛选，反应条件的选择和优化，建立了古典狂犬病病毒荧光RT—PCR检测技术。与病毒分离鉴定、常规RT—PCR试验比较表明，建立的荧光PCR检测技术快速、敏感，检测时限3h以内。特异性试验表明本方法与犬瘟热病毒，犬细小病毒，犬I型腺病毒不发生交叉反应。初步动物感染试验及定量检测研究及表明，本方法可用于感染动物不同组织样品中病毒的相对定量。对132份临床样品和4种商品化疫苗进行检测研究表明，本方法适