【摘 要】
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构建pET-32m-Mce2R原核表达质粒,对重组蛋白Mce2R进行诱导表达、纯化及活性鉴定.以结核分枝杆菌H37Rv全基因组为模板,经聚合酶链式反应(PCR)扩增Mce2R(Rv0586)基因片段,产物经BamHⅠ和HindⅢ限制性内切酶酶切,电泳验证后与同样双酶切后的载体质粒pET32m进行连接,将连接产物pET-32m-Mce2R转化到大肠杆菌DH5a中,抽提质粒后测序验证,重组载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)中以IPTG诱导表达,利用亲和层析纯化,经SDS-PAGE检测目的蛋白,分子量约为29
【机 构】
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许昌学院食品与药学院,许昌学院河南省食品安全生物标识快检技术重点实验室
【基金项目】
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河南省科技厅科技攻关项目(182102310628,182102310071),河南省高等学校重点科研项目计划(20A180029,21A180025)。
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构建pET-32m-Mce2R原核表达质粒,对重组蛋白Mce2R进行诱导表达、纯化及活性鉴定.以结核分枝杆菌H37Rv全基因组为模板,经聚合酶链式反应(PCR)扩增Mce2R(Rv0586)基因片段,产物经BamHⅠ和HindⅢ限制性内切酶酶切,电泳验证后与同样双酶切后的载体质粒pET32m进行连接,将连接产物pET-32m-Mce2R转化到大肠杆菌DH5a中,抽提质粒后测序验证,重组载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)中以IPTG诱导表达,利用亲和层析纯化,经SDS-PAGE检测目的蛋白,分子量约为29
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