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目的探讨昆明小鼠胚胎成纤维细胞分离与培养条件。方法取昆明小鼠胚胎消化分离制备细胞悬液,观察胰蛋白酶浓度、胎龄选择及接种浓度对成纤维细胞质量的影响。结果采用0.0625%胰蛋白酶分段消化孕13.5~14.5d胎鼠可制备足量、高活力的细胞悬液,以(30~40)×10^5/ml接种浓度接种时细胞生长状态较理想。结论昆明小鼠可分离成纤维细胞,用于滋养层制备。