【摘 要】
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背景与目的:肿瘤细胞可表达FasL,从而诱导表达Fas的T细胞凋亡,即肿瘤细胞的"Fas反击作用".本研究通过检测抗Fas核酶对小鼠T细胞凋亡的抑制作用,探索增强T细胞抗肿瘤能力的新
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院血液科
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背景与目的:肿瘤细胞可表达FasL,从而诱导表达Fas的T细胞凋亡,即肿瘤细胞的"Fas反击作用".本研究通过检测抗Fas核酶对小鼠T细胞凋亡的抑制作用,探索增强T细胞抗肿瘤能力的新途径.方法:设计并合成针对小鼠Fas基因的锤头状核酶,检测其对Fas mRNA的体外切割能力.通过电穿孔转染法将其导入小鼠脾脏T细胞,同时设立空白对照组和空载体转染组,通过逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)、Western blot检测细胞上Fas的表达.细胞经抗Fas的抗体(JO2)作用后,流式细胞仪检测细胞凋亡,MTF法测转染前后细胞的增殖,以乳酸脱氢酶试验检测细胞毒性T细胞的体外杀伤活性.结果:抗Fas核酶能显著切割Fas mRNA,切割效率为60%.核酶组细胞表面的Fas水平显著低于对照组及空载体组(0.4 vs.1.1,1.0,P＜0.01).经抗Fas抗体处理后,核酶组细胞的凋亡率明显低于对照组及空载体组(35%vs.86%,87%,P＜0.01);核酶组的细胞增殖活性显著高于对照组及空载体组(208%vs.100%,98%,P＜0.01);核酶组T细胞的体外杀伤活性明显强于其它2组细胞(67%vs.32%,31%,P＜0.01).结论:抗Fas核酶能显著降低小鼠脾脏T细胞的Fas水平,使细胞免于Fas途径的凋亡,从而增强T细胞的抗瘤能力.
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