目的建立乳制品中泛酸和生物素的高效液相色谱同时测定方法。方法样品经硫酸钠沉淀蛋白后,采用C18柱分离,以0.005 mol/L己烷磺酸钠(用磷酸p H值2.3):乙腈为流动相,流速为1.0 ml/min,柱温为40℃,检测波长为200nm。以保留时间定性,峰面积定量。结果所测2种物质的线性范围为0.10~2.0μg/ml;相关系数均大于0.999;泛酸检出限为0.082μg/kg(牛奶)和0.75μg/kg(奶粉),生物素检出限为0.047μg/kg(牛奶)和0.43μg/kg(奶粉);泛酸测定限为0.27 mg/kg(牛奶)和2.5 mg/kg(奶粉),生物素测定限为0.16 mg/kg(牛奶)和1.4 mg/kg(奶粉)。方法的日内精密度为1.86%~3.79%,日间精密度为2.01%~3.28%。回收率范围为70.9%~106%(奶粉)和72.8%~108%(牛奶)。结论建立的方法具有简便、快速、重现性好等特点,可用于牛奶和奶粉中泛酸和生物素的同时快速测定。