背景:肝细胞在体外迅速失去极性及合成代谢障碍成为肝脏组织工程研究需要克服的一个难题,在体外寻找一个有利于肝细胞生长与功能维持的细胞外基质微环境成为目前研究的焦点。目的:制备肝脏去细胞化细胞外基质生物衍生支架,并对该生物衍生支架进行初步鉴定。设计、时间及地点:观察性实验,于2008-02-15/05-01在广东省脑功能修复与再生研究所完成。材料:10只雄性SD大鼠用于制备去细胞肝脏细胞外基质支架。10只雄性SD大鼠用于制备原代肝细胞。方法:将SD大鼠肝脏切成10mm×5mm的组织片后,经过胰酶-乙二胺四乙酸作用24h、去垢剂曲拉通×10072h后得到肝脏去细胞化生物衍生支架。每只大鼠获取2×108个肝细胞,将所得原代细胞与肝脏去细胞化生物衍生支架放入含DMEM-F12,体积分数为10%胎牛血清,胰岛素0.5U/mL,地塞米松1×10-7mmol/L,表皮生长因子10μg/L的培养基中共培养,并与单纯原代细胞培养相比较。主要观察指标:培养14d时组织块行苏木精-伊红染色,Masson染色进行组织学分析。并行扫描电镜观察。对培养1,3,5,7,9,14d上清液进行白蛋白及尿素水平检测。结果:组织学检查未见明显细胞核残存,大量胶原纤维得到保留,扫描电镜示纤维成网状排列。支架与原代肝细胞共培养上清液白蛋白和尿素水平高于单纯原代肝细胞培养(P<0.05)。结论:利用去垢剂与胰酶-乙二胺四乙酸低渗溶液处理可以有效完整去除肝脏组织块的细胞成分,较完整地保留细胞外基质;该生物衍生支架有利于肝细胞的生长及功能维持。